藥敏實驗紙片擴散法是一種用于檢測細菌對抗菌藥物敏感性的實驗方法，它通過觀察含有定量抗菌藥物的紙片在已接種待檢菌的瓊脂平板上形成的抑菌圈的大小，來判斷細菌對藥物的敏感程度。以下是對藥敏實驗紙片擴散法操作步驟的具體介紹：

　　

　　1、準備材料：確保所有設備和材料處于良好狀態，包括恒溫培養箱、比濁儀、0.45%NaCl溶液、一次性使用拭子、無菌醫用棉簽、游標卡尺、鑷子等。同時，準備好水解酪蛋白（Mueller-Hinton，M-H）培養基，其PH值應為7.2-7.4，這是CLSI推薦的兼性厭氧菌和需氧菌藥敏試驗標準培養基。

　　

　　2、制備菌懸液：選擇適當的方法制備接種菌液。直接菌落法是用一次性拭子挑取生長在無選擇性瓊脂平板上的新鮮菌落，懸浮于0.45%生理鹽水中，混勻后調整濁度至0.5麥氏濁度。肉湯增菌法則是將單個菌落接種至肉湯培養基，孵育并調整濁度至0.5麥氏濁度。

　　

　　3、接種平皿：用無菌醫用棉簽蘸取調好的菌液，在試管內壁將多余的菌液旋轉擠去后，在瓊脂表面均勻涂布接種三次，每次旋轉平板60°，最后沿平板邊緣涂抹一周。

　　

　　4、貼抗菌藥物紙片：接種好的藥敏平板在室溫下放置3~5分鐘后，用無菌鑷子將藥敏紙片貼于平板表面，并用鑷尖輕壓一下紙片，使其貼平。

　　

　　5、孵育：貼上紙片后，須在15分鐘內倒置平板，并放入35℃孵箱中培養18~24小時。對于某些特殊抗菌藥物如苯唑西林或萬古霉素，孵育時間需延長至24小時。

　　

　　6、結果判讀：用游標卡尺測量抑菌圈直徑，測量時應將平板置于黑色背景下，肉眼判讀。根據抑菌圈的大小，可以判斷細菌對藥物的敏感程度，并據此報告“敏感”、“劑量依賴性敏感”、“中介”、“耐藥”和“非敏感”等結果。

　　

　　總的來說，藥敏實驗紙片擴散法是一種重要的微生物學實驗方法，它通過簡單的操作步驟和直觀的結果判讀，為臨床醫生提供了關于病原微生物對抗菌藥物敏感性的重要信息。